三种生境少孢节丛孢生长特性和捕食效力比较

摘要：比较分离自温泉、淡水及土壤的捕食线虫真菌――少孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）的生长特性及捕食效力。通过测定三种生境少孢节丛孢在不同温度、pH及有氧和无氧条件下的生长率及其在最适培养条件下对线虫的捕食率，得出三种生境中少孢节丛孢的最适生长温度均为30 ℃，分离自温泉和土壤的少孢节丛孢最适pH分别为5.5～7.0和4.5～5.5，而淡水生境少孢节丛孢对不同pH具有广泛适应性；淡水和温泉生境少孢节丛孢对无氧环境有一定的耐受性，而土壤生境少孢节丛孢在无氧环境下生长率低至1.24 cm/5 d。三种生境的少孢节丛孢捕食效力没有显著性差异。

关键词：生境；少孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）；生长特性；捕食效力

中图分类号：S476.15 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）07-1609-03

线虫病是动植物的一大类寄生虫病，每年给农牧业造成巨大的损失[1，2]。长期使用化学药物对寄生虫病进行防治，易使虫体产生抗药性，且化学药物的某些有害成分排出机体后，会对环境造成污染，进而影响自然界的生态平衡；药物残留成分随着畜产品和农产品――奶、蛋、肉、蔬菜、水果等进入人体，最终对人体健康造成危害。因而用捕食线虫真菌对寄生线虫进行生物防治，可以避免上述问题的产生，无论从经济效益还是从社会效益来看，其发展和应用的前景都是巨大的[3]。国内外在农作物线虫的生物防治上已有了商品化的食线虫真菌制剂。从自然环境中筛选捕食线虫真菌并对其生长特性及捕食效力测定是捕食线虫真菌作为生防菌株筛选的重要环节之一，而不同生境捕食线虫真菌的生长特性及捕食效力是否存在差异，目前还没有相关报道。少孢节丛孢是目前研究最为全面的捕食线虫真菌之一[4-10]。近年来，本实验室先后从大理周边环境分离得到不同生境的少孢节丛孢菌株，旨在比较来自温泉、淡水和土壤的少孢节丛孢菌株在不同温度、pH、有氧和无氧条件的生长特性及其捕食效力的差异，探讨不同生境对捕食线虫真菌适应能力的影响，研究结果可为今后生防捕食线虫真菌的筛选和应用提供理论依据和数据支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌种 三种生境少孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）菌株由大理学院农学与生物科学学院微生物实验室提供。

1.1.2 培养基的配制 0.4 g/L 玉米粉琼脂培养基（CMA）：称取40 g新鲜玉米粉，加入1 000 mL去离子水，微火煮沸1 h，补足水分至1 000 mL，用纱布过滤后，取滤液10 mL，加990 mL去离子水，再加入20 g琼脂粉，经121 ℃ 30 min高压灭菌后，倾注于直径为60 mm的灭菌玻璃培养皿中备用。不同pH培养基配制方法同上，然后用1 mol/L NaOH和HCl分别调整pH至4.5～8.5，经121 ℃ 30 min高压灭菌后，倾注于直径为60 mm的灭菌玻璃培养皿中备用。

1.1.3 线虫幼虫混悬液 全齿复活线虫（Panagrellus redivivus）由农学与生物科学学院微生物实验室提供，制备成线虫幼虫混悬液（约5 000条/mL）备用。

1.2 生长率比较

1.2.1 不同温度下生长率的比较 取20 ℃ 0.4 g/L CMA中培养7 d的3株少孢节丛孢，在培养基边缘切取5 mm×5 mm的小块，分别接种于pH 6.0～6.2的0.4 g/L CMA上，每种菌株分为9组，每组含3个培养基，分别置于5、10、15、20、25、30、35、40、45 ℃条件下培养，5 d后测算其生长率。

1.2.2 不同pH下生长率的比较 取20 ℃ 0.4 g/L CMA中培养7 d的3种菌株，在培养基边缘切取5 mm×5 mm的小块，接入制备好的CMA固体培养基中。每种菌株分为9组，分别置于pH 4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5的培养基中，每组含3个培养基，做好标记后放入30 ℃恒温箱内培养7 d。接种次日开始每天定时测量1次菌落直径，直至长满平板。然后测算其生长率。

1.2.3 有氧和无氧条件下生长率的比较 每种菌株分为2组，每组含3个培养基，所用培养基和接种方法同前。接种菌丝后，分别置于30 ℃有氧和无氧条件下培养，5 d后分别进行生长率的测定。

1.3 三种菌株捕食线虫效力比较

试验共设4个组，每组3次重复。第1、2、3组分别接种三种生境少孢节丛孢菌株，第4组为对照组（无菌株）。将各组置于各自最适培养条件下，5 d后，每个平皿内加入幼虫悬液1 mL（5 000 条/mL），在体视显微镜下检查其活力，3 d后统计线虫的死亡率。按下列公式计算出菌株捕食线虫的效力，用百分率表示。试验结果采用t检验法进行统计学分析。

R=X/（X+Y）×100%。其中，R为捕食率，X为被捕获的虫体数，Y为自由活动的虫体数。

1.4 数据处理

测定各组捕食线虫真菌的菌落直径，以平均值±标准差表示。不同处理试验结果间的差异显著性，采用新复极差法（SSR）进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 生长率比较

2.1.1 不同温度下生长率比较 由表1可见，三种生境的少孢节丛孢最适生长温度为30 ℃。统计分析表明此温度条件下，真菌的生长速度与其他温度间差异显著。

2.1.2 不同pH下生长率的比较 由表2可见，三种生境捕食线虫真菌生长最适pH不同。方差分析表明，分离自淡水的捕食线虫真菌在pH 5.0、5.5时，其生长率差异显著，在pH 7.0、7.5时，真菌生长较好；分离自土壤的捕食线虫真菌在pH 4.5～5.5之间，真菌生长较好；分离自温泉的捕食线虫真菌在pH 5.5～7.0之间，真菌生长较好。