不同酸提取对维生素C测定结果的影响
摘要：试验以4种酸作为提取剂，研究不同浓度酸提取下维生素C含量的变化，并进一步探讨混酸对测定结果的影响。结果表明，草酸、盐酸和醋酸均以2%浓度提取效果最好，磷酸则以8%浓度最佳，其中2%草酸测定结果最高；2%草酸-8%磷酸测定结果显著高于其他混合酸处理，但低于单酸处理。相关分析结果显示，3种最佳浓度单酸之间相关显著，2%草酸-8%磷酸混合酸与2%草酸和2%盐酸显著相关。
关键词：维生素C；滴定法；酸提取；相关
中图分类号：TQ460.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）18-4799-03
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.042
维生素C（Vitamin C）又名L-抗坏血酸，是新鲜水果和蔬菜中含量非常丰富的一种水溶性维生素。维生素C可以增强机体免疫力，在机体新陈代谢中起着重要的作用，其含量常常作为衡量果蔬品质的重要指标之一。维生素C含量测定的方法有滴定法、比色法和色谱法，经典的滴定法有碘量法和2，6-二氯酚靛酚法，无需特殊仪器且操作简便、快速，测定结果准确可靠，在教学及科研分析中广泛应用。
维生素C还原性很强，在空气中很容易被氧化，提取时可通过加入弱酸的方法增加其提取液的稳定性。常用的酸有醋酸[1，2]、草酸[3-5]和盐酸[5]，也有用两种酸的混合液进行提取的报道，如偏磷酸-醋酸[1]和草酸-盐酸[6]，鉴于偏磷酸有剧毒，且室温下易水合成磷酸从而影响其对维生素C的稳定作用。因此，本试验选择草酸、磷酸、盐酸和醋酸4种酸，设置5种浓度梯度，研究不同酸提取浓度对滴定法测定维生素C含量的影响，在此基础上筛选出最佳酸浓度，采用两两混合的方法，进一步探讨混合酸对测定结果的影响。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
选择维生素C含量较高的猕猴桃和柿子椒作为供试材料。
试剂：碘酸钾、碘化钾、淀粉、盐酸、2，6-二氯酚靛酚、碳酸氢钠、维生素C、草酸、磷酸、盐酸、醋酸，均为分析纯，活性炭。
1.2 方法
维生素C含量的测定参考王秀奇等[7]的方法。材料清洗擦干后，去皮去子，用搅拌机快速打成匀浆，称取5 g置于不同酸提取液中，0.5 g活性炭脱色10 min，然后分别用两种滴定方法进行维生素C含量测定。滴定时以颜色持续5 s不退为终点，整个滴定过程不超过2 min。另取相应提取酸酸化的蒸馏水做空白对照滴定。每种提取酸均设置5种浓度：1%、2%、4%、8%、10%。混酸选择单酸最佳浓度，按1∶1（V/V）混合后进行提取。各处理均重复3次。
碘量法计算公式：VC（mg/100 g）=■×■×100
式中，V为样品滴定所用KIO3体积减去空白滴定所用体积；B为滴定时样品液体积；b为样品提取液体积；a为样品质量。
2，6-二氯酚靛酚法计算公式：VC（mg/100 g）=■×100
式中，VA为滴定时所用2，6-二氯酚靛酚体积；VB为空白所用2，6-二氯酚靛酚体积；S为1 mL 2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素C量，详见表1；W为10 mL样品提取液中含有样品量。
1.3 数据分析
所有数据均为测定平均值，数据采用SAS 9.0 软件进行统计分析，LSD法多重比较。
2 结果与分析
2.1 不同酸提取浓度对维生素C测定结果的影响
如表2所示，猕猴桃和柿子椒的测定结果较为一致，碘量法的测定数据均高于2，6-二氯酚靛酚法，表明测定方法会影响测定结果。从提取酸浓度来看，草酸、盐酸和醋酸浓度都在2%时最大，然后呈显著下降趋势。随着酸浓度的增加，磷酸的测定结果不断增加，在8%时取得最大值，10%则显著降低。在碘量法中，猕猴桃用2%草酸、2%盐酸、2%醋酸和8%磷酸提取的结果分别是效果最差组的1.08、1.39、1.18和1.30倍。
对于同种浓度而言，不同酸提取的结果也存在显著差异，其中柿子椒的两种滴定法均为草酸效果最好，其次是醋酸和磷酸，盐酸的测定结果整体偏低。猕猴桃在草酸浓度为1%、2%和4%时测定结果较大，8%和10%的磷酸处理显著高于草酸，表明酸浓度和酸种类都显著影响维生素C提取量。综上所述，测定维生素C时提取效果较好的酸是2%草酸。
2.2 不同混酸提取对维生素C测定结果的影响
将2%草酸、2%盐酸、8%磷酸和2%醋酸进行两两混合，比较混酸提取对测定结果的影响。如表3所示，碘量法中猕猴桃和柿子椒结果一致，均为2%草酸-8%磷酸处理的测定结果最大，并显著高于其他处理。除2%草酸-8%磷酸外的5种混酸处理之间差异也达到显著水平，其中2%盐酸-8%磷酸提取效果最差，猕猴桃和柿子椒分别比2%草酸-8%磷酸少35%和16%。在2，6-二氯酚靛酚法中，2%草酸-8%磷酸提取效果最好，2%盐酸-8%磷酸最差。与猕猴桃各处理间差异均显著不同，柿子椒的2%盐酸-8%磷酸和2%醋酸-8%磷酸差异不显著，这可能是品种之间的差异所致。
2.3 不同酸提取测定结果的相关性分析
除盐酸外，混合酸的提取效果并不好于单酸。相关性分析结果（表4）表明，除8%磷酸外，2%草酸、2%盐酸和2%醋酸之间相关性均达到显著水平，即这3种单酸的提取效果较为一致。2%草酸-8%磷酸的混合酸处理与2%草酸和2%盐酸显著相关，但与8%磷酸和2%醋酸相关不显著。
3 结论与讨论
提取酸的种类和浓度均影响维生素C的测定结果。张淑民等[8]研究表明3%醋酸处理效果最好，本试验扩大了浓度梯度，并得出醋酸的较佳提取浓度为2%。与醋酸相同，草酸和盐酸均在较低浓度（2%）时提取效果较好，磷酸则在高浓度（8%）时达到最佳提取效果，其中草酸和醋酸测定结果较高，且显著相关，表明滴定法测定维生素C含量时可选择草酸或醋酸进行提取。用2%草酸-10%盐酸的混酸提取维生素C，其测定结果与2%草酸、4%醋酸并无显著差异[6]，本试验中混酸的测定结果以2%草酸-8%磷酸最高，虽与2%草酸和2%盐酸显著相关，但在数值上低于单酸，可见混酸提取效果并不优于单酸。
参考文献：
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[7] 王秀奇，秦淑媛，高天慧，等.基础生物化学实验[M].北京：高等教育出版社，2010.195-199.
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